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傳代細胞的傳代方法及操作過程實驗原理傳代培養(yǎng)是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1：2或1：2以上的比例轉移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。這種培養(yǎng)，*步也是制備細胞懸液，當細胞長成致密單層時，它很容易被蛋白水解酶和EDTA）所破壞。所以—般采用胰蛋白酶和EDTA（乙二胺四乙酸鹽）的混合物，做為消化液。細胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又要求十分嚴謹的實驗技術。要使細胞能在體外長期生長，必須滿足兩個基本要求：一是供給細胞存活所必需的條件，如適量的水、無機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關的生長因子、氧氣、...

李斯特菌（也稱李氏桿菌）引起的急性傳染病，以敗血病為主要癥狀，伴有內臟器官和中樞神經系統病變。李斯特菌是1926年英國南非裔科學家穆里在病死的兔子體內發(fā)現的，為紀念近代消毒手術之父、英國生理學家約瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三屆微生物學大會命名為李斯特菌。單核細胞增生李斯特氏菌是一種人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表現為敗血癥、腦膜炎和單核細胞增多。它廣泛存在于自然界中，食品中存在的單增李氏菌對人類的安全具有危險，該菌在4℃的環(huán)境...

培養(yǎng)細胞的常規(guī)檢查和觀察方法細胞培養(yǎng)后,需要對其生長狀況、形態(tài)甚至生物學性狀連續(xù)地進行觀察.由于細胞小而復雜,若不借助適當的手段,則難以觀察期形態(tài)、結構,更難發(fā)現細胞內各種組分的分子組成及功能.目前,已有多種研究細胞的技術,從光學顯微鏡到電子顯微鏡,從一般細胞化學法到免疫化學法.細胞培養(yǎng)后,需要對其生長狀況、形態(tài)甚至生物學性狀連續(xù)地進行觀察.由于細胞小而復雜,若不借助適當的手段,則難以觀察期形態(tài)、結構,更難發(fā)現細胞內各種組分的分子組成及功能.目前,已有多種研究細胞的技術,從光...

上皮細胞的培養(yǎng)方法上皮細胞的培養(yǎng)方法上皮細胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細胞培養(yǎng)特別受到重視.但上皮細胞培養(yǎng)中常混雜有成纖維細胞,培養(yǎng)時生長速度往往超過上皮細胞,并難以純化,同時上皮細胞難以在體外長期生存,因此純化和延長生存時間是培養(yǎng)關鍵.體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長,另外人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3細胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）時,細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現象.降低PH、Ca...

細胞的復蘇及凍存方法一.細胞復蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細胞懸液，于1500轉/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養(yǎng)基質混勻細胞沉淀，再1500轉/分，離心3分鐘，棄上清，細胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻，備用。另取一個75cm2方瓶，加入14.0ml培養(yǎng)基質，將上述制備的含腫瘤細胞懸液（1.0ml）加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細胞懸浮生長，大約3－4天細胞基質會變黃，5....

微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術－、安瓶管開封1．用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。2．用火焰將安瓿管頂端加熱。3．滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。4．用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。二、菌株恢復培養(yǎng)1．用無菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。3．若未能活化，或活化后有...

大腸桿菌一般培養(yǎng)方法使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基組成成分：牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl5g,瓊脂15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。具體配置步驟：1.稱藥品按實際用量計算后,按配方稱取各種藥品放入大燒杯中.牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶解后倒入大燒杯;也可放在稱量紙上稱量,隨后放入熱水中,牛肉膏使與稱量紙分離,立即取出紙片.蛋白胨極易吸潮,故稱量時要迅速.2.加熱溶解在燒杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉網上,小火加熱,并用玻棒攪拌,待藥品*溶解...

細胞傳代的一般方法開始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細胞（單層細胞，鏡檢適合）、培養(yǎng)液（MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細胞有要求的培養(yǎng)液）、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1萬單位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶（100m1）、克氏瓶、膠塞、吸管（10ml、1m1）、細胞吹打管（20ml）（以上用具需經121℃至少15分鐘高壓滅菌）C02孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰...