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養(yǎng)好細(xì)胞注意點(diǎn)(三)

更新時(shí)間:2017-05-10      點(diǎn)擊次數(shù):3534

 (一)如何避免細(xì)胞污染

細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、真菌、霉菌、病毒等。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染的血清和污染的細(xì)胞等。嚴(yán)格無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好的細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染的方法。

(二)支原體 (mycoplasma)污染的細(xì)胞, 對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響

不能以肉眼觀察出支原體污染異狀。除極有經(jīng)驗(yàn)的專家外,大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株,無法以其外觀分辨。

支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞的生長參數(shù),代謝及研究任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,必須確認(rèn)細(xì)胞為 mycoplasma-free,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)方有意義。

(三)培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中,顏色會(huì)偏暗紅色,且 pH 值會(huì)越來越偏堿性

培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)的 CO2 會(huì)逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑 (通常為 phenol red)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿的結(jié)果,將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí),可以通入無菌過濾 CO2 ,以調(diào)整 pH 值?;蛩釅A調(diào)PH。

(四)L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解,L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。

(五)什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為 PH 值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時(shí),不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

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